Santa Cruz 新品- CRISPR/Cas9 質(zhì)粒-New

一 CRISPR/Cas9基因敲除質(zhì)粒

1）每個Knockout 質(zhì)粒產(chǎn)品設(shè)計為3個質(zhì)粒，確保對特定基因識別和剪切效率達(dá)到zui大。每個質(zhì)粒編碼*的20個核苷酸，序列來自GeCKO文庫。

2）Cas9/gRNA 復(fù)合體與靶DNA 的PAM（NGG）位點結(jié)合，并解旋DNA

gRNA與PAM位點附件的靶位點特異結(jié)合。

3）通過3個gRNA的向?qū)В?/span>Cas9在3個特定位點對目的基因的5’外顯子進行剪切。

二、HDR 同源修復(fù)質(zhì)粒

1）每個HDR產(chǎn)品包含了3種質(zhì)粒，這三種質(zhì)粒對相應(yīng)的CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒導(dǎo)致的缺口特異性修復(fù)。

2）HDR質(zhì)粒為DSB提供特定的修復(fù)模板

3）每個HDR質(zhì)粒包含兩個800堿基對同源臂，可特異的與相應(yīng)的cas9誘導(dǎo)的雙鏈DNA破壞位點周圍的基因組DNA結(jié)合。

4）與敲除質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染時，HDR質(zhì)粒的puro基因，用于篩選穩(wěn)定的敲除克隆。

5）每個嘌呤霉素抗性基因兩側(cè)各有一個Loxp位點，便于Cre載體進一步處理。

三、雙切口酶質(zhì)粒（Double Nickase Plasmids）

1）每個雙切口酶質(zhì)粒由一對各自編碼 D10A突變型Cas9核酸酶和特異性20nt 組成，與CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒相比，具有更高的特異性。

2）成對gRNA序列設(shè)計為大約5-20個堿基對的偏移，所形成的DNA雙切口被識別為功能性雙鏈斷裂。

3）每個casn/sgNA復(fù)合物在與向?qū)?/span>RNA互補的DNA鏈僅產(chǎn)生一個切口。

4）使用成對的向?qū)?/span>RNA可提高特異性且可zui低化脫靶效應(yīng)。

四、CRISPR/dCas 激活質(zhì)粒

1）用于激活內(nèi)源基因的表達(dá)。包含三種質(zhì)粒，幾個修飾組件形成協(xié)同激活介質(zhì)（SAM）復(fù)合體，這個SAM復(fù)合體代表了迄今為止，zui有效的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)。